薇菜作為食用蔬菜已有悠久的歷史，過(guò)去在荒年是救荒草，現已步入高檔餐桌，其經(jīng)濟效益為一般蔬菜的4～5倍。野生薇菜鮮嫩味美，營(yíng)養豐富，未展開(kāi)的嫩葉尤為上品。薇菜既可鮮食，又可腌漬、干制，是向日本出口的大宗山珍野菜。水煮薇菜中主要含有防腐劑和甜味劑，由于日本的標準嚴苛，因此檢測出口食品中的食品添加劑含量達到標準，對于國內食品添加劑含量的檢測也是一種保障。

我國標準檢測方法有很多，如滴定法、比色法、薄層色譜法、氣相色譜法等，但都是對樣品分別處理進(jìn)行不同方法的測定，沒(méi)有同時(shí)檢測的方法?，F在相對先進(jìn)的檢測機構都在研究這5種食品添加劑同時(shí)檢測的方法，針對于不同的基質(zhì)使用不同方法，目前按照檢測樣品的不同大致可以分為肉食品、飲品、乳制品、含油量高的基質(zhì)和普通基質(zhì)等檢測方法。在我國國標中，最早出現對于食品添加劑檢測的是在2003年，那時(shí)的檢測針對于單獨的添加劑且方法相對落后。本法采用一種簡(jiǎn)單的前處理方法，使用的樣品為水煮薇菜，基質(zhì)簡(jiǎn)單易得，用高效液相色譜法對5種添加劑同時(shí)進(jìn)樣，一次檢測得到多種結果，大大節省了人力、物力和時(shí)間，結果準確可靠。

一、材料與方法

1、材料與試劑

甲醇（色譜純）：FisherScientific公司；乙酸銨（分析純）、稱(chēng)取1.54g乙酸銨加水溶解并稀釋至1000mL，靜置，過(guò)0.45μm孔徑濾膜，鹽酸（分析純）：量取100mL鹽酸，與100mL水充分混合，靜置）；氨水、乙醚（分析純）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；實(shí)驗用水為屈臣氏蒸餾水

2、儀器與設備

LX—130離心機（控溫）日本TOMY公司；UW402S電子天平，梅特勒一托利多有限公司；UMV一2多管渦旋混合器，北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司；Agilent一1100高效液相色譜儀，安捷倫公司；50mL離心管、10mL移液管、移液槍、一次性吸管、pH試紙、0.5μm水性濾膜等。

3、樣品前處理

大多數樣品中存在許多大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪等，需要使用沉淀劑進(jìn)行凈化處理，如乙酸鋅、亞鐵氰化鉀等，但本樣品不含有上述大分子物質(zhì)，故無(wú)需進(jìn)行凈化操作。

本法為反提法，即將樣品中的食品添加劑先正提取到乙醚層中，后用水反提取至水層中，定量檢測水層中的食品添加劑。

將水煮薇菜經(jīng)破碎處理后，稱(chēng)取2.0g樣品于50mL離心管中，加水10mL和0.5mL鹽酸（1+1）進(jìn)行酸化處理。加入乙醚8mL震蕩提取2次（共16mL），合并提取液。將提取液震蕩，離心（4000r／nlin，5min），棄掉下層水層，向提取液中準確加入10.0mL水，加氨水調節pH為7～8，震蕩離心（4000r／min，5min），取下層水層過(guò)0.45μm水性濾膜。

4、標準品配制

標準物質(zhì)純品溶液稀釋?zhuān)渲瞥?0mg／L濃度的儲備液，將儲備液稀釋成0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.10rng／mL的標準溶液，用于測定標準曲線(xiàn)。

5、色譜柱條件

WatersSymmetryShieldC18（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.02mol／L乙酸銨一甲醇（100+5）緩沖溶液，檢測波長(cháng)為220mm，紫外檢測器，柱溫25℃，流速1mL／min，進(jìn)樣量10μL。

6、精確度測定

為保證試驗精確度，取6份樣品分別編號1，2，3，4，5，6，各稱(chēng)取2g于50mL離心管中，加入10mL水和0.5mL鹽酸（1+1）進(jìn)行酸化處理。分別加入8mL乙醚提取2次（共16mL），合并提取液經(jīng)震蕩離心（4000r／min）5min，棄去下層水層，準確加入10.0mL水，用氨水調節pH為7～8，震蕩離心（4000r／rnjn，5min），取下層水層過(guò)0.45μm水性濾膜。

7、準確度測定

為保證試驗方法提取到的添加劑含量的有效性，人為地向樣品中添加定量標準物質(zhì)進(jìn)行檢測，通過(guò)回收率判斷樣品的檢測結果是否有效。大量實(shí)驗證明，當回收率在85％～110％之間時(shí)，結果可靠。向樣品中加入1mg／L的混標溶液，與樣品進(jìn)行相同的前處理步驟，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后進(jìn)儀器檢測。

二、結果與分析

1、標準曲線(xiàn)的建立

對混標稀釋后濃度為0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.10mg／mL的標準系列溶液進(jìn)行測定，以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線(xiàn)，分別得到回歸方程，見(jiàn)表1。安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種添加劑的出峰圖見(jiàn)圖1，按照出峰的時(shí)間分別是安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉。

由表1可知，該混標溶液出峰時(shí)間分散，在檢出限濃度范圍內呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

由圖1可知，5種添加劑出峰時(shí)間間隔明顯，且峰不存在重合現象，即如果樣品中含有上述5種添加劑，譜圖中會(huì )在相應位置出峰。

2、樣品測定

對水煮薇菜使用反提法檢測食品添加劑含量，其結果見(jiàn)表2，譜圖見(jiàn)圖2。

對比圖1和圖2可以看出，圖2中的譜圖沒(méi)有在相應位置出峰，所以水煮薇菜樣品中不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉這5種食品添加劑。

3、精確度試驗

為保證樣品的精確度，分別對水煮薇菜進(jìn)行6次平行試驗，試驗結果見(jiàn)表3。
 

由表3可知，進(jìn)行6次平行試驗均無(wú)檢出添加劑，可能的情況是含有添加劑，但含量低于檢出限導致未檢出；另一種情況是均不含添加劑，故無(wú)檢出。上述2種情況均達到標準，結果判定為水煮薇菜不含有安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸鈉5種添加劑。

4、準確度試驗

為了保證檢測的準確度，進(jìn)行回收試驗，標準曲線(xiàn)見(jiàn)圖3，結果見(jiàn)表4。

由圖3和表4可知，人為加入含有混標的樣品檢測結果是含有添加劑的，且同一種方法回收得到的添加劑含量不同?；厥章士梢宰C明該方法得到的結果可信，因為在前處理過(guò)程中提取得到的添加劑會(huì )有一定程度的損失；當回收率低于100％時(shí)證明提取不完全或者有損失；當回收率高于100％時(shí)，說(shuō)明樣品中同時(shí)也含有該添加劑。本法的相關(guān)系數均在0.999以上，回收率在89％以上，說(shuō)明試驗結果可靠。

5、結果計算

樣品中山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉、安賽蜜、糖精鈉的含量按照下式計算：

式中：X為樣品中食品添加劑含量，mg／kg；A為進(jìn)樣體積中食品添加劑的含量，mg；V為試樣稀釋體積，mL；m為試樣質(zhì)量，g。

三、討論

試驗表明：對樣品進(jìn)行破碎、浸提后，使用WatersSymmetryShieldC18（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.02mol／L乙酸銨一甲醇（100+5）緩沖溶液，檢測波長(cháng)為220mm，紫外檢測器，柱溫25℃，流速1mL／min，進(jìn)樣量10μL時(shí)，混標中安賽蜜、糖精鈉、山梨酸、苯甲酸、脫氫醋酸鈉的出峰時(shí)間分別為4.785，6.681，8.117，11.310，12.987min，樣品中未檢出。不同回收率表明在實(shí)驗操作過(guò)程中，會(huì )有不明原因的損失，可能是提取時(shí)間不足，可能是提取試劑還有待改善，還有可能是檢測時(shí)間不及時(shí)，導致部分添加劑降解。在國標中以水煮薇菜為例，使用反提法檢測5種食品添加劑，方法簡(jiǎn)便，可以節約大量人力、物力，節約成本和資源，加快工作效率。

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