3、色譜標準

Agilent5HC-C18（2）（4.6×250mm，5μm）離子交換柱，進(jìn)樣量20μL，流動(dòng)速度1.0mL/min，柱溫35℃，以工業(yè)甲醇做為流動(dòng)性相A，以0.02moI/L乙酸銨水溶液為流動(dòng)性相B，梯度方向過(guò)柱，過(guò)柱標準見(jiàn)表1。應用二極管列陣探測器，光譜儀范疇190～700nm；光譜儀步進(jìn)電機數值2.0nm，光譜儀收集方式。以保存期及光譜圖判定，在230nm和625nm光波長(cháng)下開(kāi)展檢驗，峰總面積外標法定量分析。

二、結果與探討

1、色譜儀標準的提升

本實(shí)驗較為乙腈-0.02mol/L乙酸銨和工業(yè)甲醇-0.02mol/L乙酸銨按表1梯度方向開(kāi)展過(guò)柱時(shí)，發(fā)覺(jué)新紅與苯甲醛，靛青與脫氫乙酸分離度達不上1.5的規定，緣故將會(huì )有幾個(gè)方面：最先，乙腈過(guò)柱工作能力比工業(yè)甲醇強，在UV光波長(cháng)較短的色譜上具備較高靈敏，且色譜儀級的乙腈是吸收力較為小的有機溶液，故乙腈過(guò)強的過(guò)柱工作能力及其乙腈獨有的特性都是會(huì )導致出峰時(shí)間靠前的目的物和殘渣峰或是鄰近的峰離不開(kāi)；次之，苯甲醛、山梨酸、脫氫乙酸、納他霉素旋光性相較檸檬黃、日落黃、誘惑紅旋光性稍強，選用乙腈階梯性梯度方向過(guò)柱，出峰速度更快，控制不了栽培基質(zhì)基準線(xiàn)影響；其次，點(diǎn)心中的栽培基質(zhì)大部分為碳酸鹽、蛋白、糖原等，乙腈過(guò)柱不可以合理規避這種栽培基質(zhì)對目的物的影響，實(shí)驗中也根據調節梯度方向過(guò)柱的占比，可是不管怎樣調節依然不能將13種總體目標物徹底分離出來(lái)，殊不知選用工業(yè)甲醇過(guò)柱可以有效的防止乙腈存有的這種難題，結果見(jiàn)圖1。此次實(shí)驗還挑選了工業(yè)甲醇一0.02mol/L乙酸銨與工業(yè)甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨水溶液開(kāi)展梯度方向過(guò)柱，13種食用添加劑均為旋光性化學(xué)物質(zhì)，與水均能相溶，選用0.02mol/L磷酸二氫銨對添加劑的分開(kāi)沒(méi)有危害，可是這一水體的流動(dòng)性相對性色譜儀分離出來(lái)危害很大，絕大多數色譜儀均不可以合理過(guò)柱，結果見(jiàn)圖2，綜合性考慮到，本實(shí)驗最后挑選工業(yè)甲醇一0.02mol/L乙酸銨按表1程序流程開(kāi)展分離出來(lái)。

2、試品前解決提升

（1）蛋白質(zhì)混凝劑的挑選

人造黑色素與添加劑、甜味素的前解決辦法不一樣，參照有關(guān)參考文獻，此次實(shí)驗對于點(diǎn)心中的栽培基質(zhì)，挑選水體蛋白質(zhì)混凝劑，即106g/L亞鐵氰化鉀和219g/L乙酸鋅水溶液做好解決，這二種水體蛋白質(zhì)混凝劑均為中性鹽，中性鹽對蛋白的溶解性有明顯危害，亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉積蛋白是一種蛋白質(zhì)變性反映，因為蛋白是一種膠體溶液，乙酸鋅與亞鐵氰化鉀反映產(chǎn)生的氰亞鐵酸鋅沉積可以?huà)蹲呋蛭烙绊懟瘜W(xué)物質(zhì)，且這二種中性鹽除蛋白質(zhì)工作能力強，與此同時(shí)濃度較高的的鹽正離子凝固工作能力很強，可以將蛋白質(zhì)分子的凝固層奪得，由于各種各樣蛋白質(zhì)分子顆粒物的大小不一樣，故蛋白質(zhì)變性需要的含鹽量也不一樣，此次實(shí)驗歷經(jīng)多次檢測，最后選用106g/L亞鐵氰化鉀水溶液和219g/L乙酸鋅解決試品中蛋白實(shí)際效果最好。

（2）固相萃取柱的挑選

此次實(shí)驗根據試品加標回收開(kāi)展調查，各自稱(chēng)量呈陰性試品6份，每一份2.59，各高精密添加規范混和貯備液1.0mL，其他稱(chēng)量破碎勻稱(chēng)的點(diǎn)心試品2.5g置50mL離心管架中，加25mL水，各加5mL106g/L亞鐵氰化鉀水溶液和5mL219g/L乙酸鋅水溶液，渦流10min后，放水滴定劑至50mL，經(jīng)10000r/min冷藏離心式10min后取下，量取上清液5mL過(guò)QasisWAX固相萃取小柱（事先經(jīng)3mL工業(yè)甲醇及其3mL水活性），棄去排出液，先后用6mL2％苯甲酸和6mL純水系統清理，再用5％氨解工業(yè)甲醇過(guò)柱并搜集于15mL離心管架中，在40℃水浴中氮吹至近干后取下置放室內溫度，用5mL水復溶沉渣，過(guò)0.45μmGHP微孔濾膜后，被測。

結果見(jiàn)表2，從結論還可以看得出，WatersOasisWAX固相萃取小柱利用率最大，對這次實(shí)驗的13種食用添加劑聚集比較好，WatersOasisHLB固相萃取小柱和WatersOasisMCX固相萃取小柱利用率其次，緣故可能是，WatersOasisWAX固相萃取小柱特性為復合型弱陽(yáng)離子互換正相反吸收劑，具備弱陽(yáng)離子互換和非極性親水性雙向功效的混和吸收劑，對強酸堿性化學(xué)物質(zhì)具備高的目的性和敏感度，含弱堿性的胺基作用官能團，適用從偏堿或中性化化學(xué)物質(zhì)中分離純化酸性物質(zhì)，可用以強酸堿性化學(xué)物質(zhì)的解決，此次實(shí)驗的13種添加物均為水溶化學(xué)物質(zhì)，選用WAX開(kāi)展聚集，2％苯甲酸清理可以將試樣中正離子狀況的雜物清理除去，再用5％氨解工業(yè)甲醇將聚集在固相萃取小柱分子結構情況的食品添加劑開(kāi)展離子化過(guò)柱出來(lái)；WatersOasisHLB內的吸收劑是根據一個(gè)“獨特的旋光性捕捉官能團”來(lái)提升對旋光性有機物的保存給予不錯的水浸潤性，用以酸堿性，中性化和偏堿化學(xué)物質(zhì)的通用性吸收劑，這類(lèi)特性用以剖析人造黑色素很好的，可是這一小柱對添加劑中的納他霉素和富馬酸二甲酯的保存聚集實(shí)際效果較弱，緣故可能是HLB內填充料是親脂化學(xué)物質(zhì)，而納他霉素和富馬酸-ep酯是吸水性的，WatersOasisMCX固相萃取小柱是復合型正離子互換正相反吸收劑，對偏堿化學(xué)物質(zhì)具備高的目的性和敏感度，MCX小柱對一部分黑色素和添加劑的聚集實(shí)際效果也非常差，不可以與此同時(shí)對13種成份開(kāi)展剖析，故此次實(shí)驗挑選WatersOasisWAX固相萃取小柱開(kāi)展。